Untersuchung zytotoxischer Mechanismen in humanen NK Zellen

Natürliche Killerzellen (NK) sind ein Teil des angeborenen Immunsystems. Sie bilden eine immunologische Synapse (IS) mit infizierten oder tumorgenen Zielzellen und töten diese durch Todesrezeptoren (Fas Ligand CD95 und Fas Rezeptor CD178) oder durch die Freisetzung von Perforin und Granzym in lytischen Granulen. Fas-FasL Bindung induziert Apoptose. Perforinfreisetzung kann entweder eine direkte Lyse der Zielzellen (Nekrose) auslösen, oder zum Eindringen von Granzymen in die Zielzelle führen, was eine Apoptose induziert. Beide NK-abhängigen Zielzelltode wurden in der Literatur beschrieben, jedoch wurden die populationsweiten Analysen lediglich durch Endpunktassays realisiert. Die dynamische Regulation der NK-abhängigen Apoptose und Nekrose von Zielzellen auf Einzelzellebene wurde noch nicht untersucht. Um dynamische Einzelzellprozesse zu studieren wurden Zielzellen, die durch menschliche NK Zellen umgebracht werden können, mit einem Zelltodsensor stabil transfiziert. Dieser Assay erlaubt die Klassifikation von Einzelzellapoptosen und -nekrosen durch unterschiedliche Fluoreszenzmuster des FRET-basierten Sensors.